重组DNA技术一般包括四步，分别是：产生DNA片段；DNA片段与载体DNA分子相连接；将重组DNA分子导入宿主细胞；选出含有所需要的重组体DNA分子的宿主细胞。具体选择哪条技术路线取决于基因的来源、基因本身的性质和遗传工程的目的。重组DNA片段的取得主要的方法有利用限制酶、机械方法、反向转录酶作用或化学方法。从蛋白质肽链的氨基酸顺序可以人工合成基因，这样的基因通常不含有内含子，但与原始位置在染色体上的基因在结构上有区别。DNA片段和载体的连接方法主要有四种：粘性末端连接、平整末端连接、同聚末端连接、人工接头分子连接。导入宿主细胞的常用方法有转化、转染、转导和注射。然而，这一步骤中可能包含不需要的DNA片段或载体分子的聚合体，因此，只有通过遗传学方法、免疫学方法和分子杂交方法才能获取真正需要的宿主细胞。构建重组体DNA分子和选择宿主细胞时还需要考虑外源基因表达的问题，以确保基因在宿主细胞中能准确转录和翻译，生成的蛋白质不被分解，并尽可能分泌到细胞外。为了实现这一目标，可以使用两种常用的方法，一种是在载体的启动基因顺序和核糖体结合顺序后面连接外源基因；另一种是将外源基因插入到载体的结构基因中，产生融合蛋白。在早期的遗传工程研究中，生长激素释放抑制因子和鼠胰岛素基因的表达就是通过将它们连接在β-半乳糖苷酶基因中实现的。

扩展资料

遗传工程，也叫基因工程(gene engineering)、基因操作(gene manipulation)或重组DNA技术(recombination DNA technique)，是20世纪70年代以后兴起的一门新技术，其主要原理是用人工的方法，把生物的遗传物质，通常是脱氧核糖核酸(DNA)分离出来，在体外进行基因切割、连接、重组、转移和表达的技术：基因的转移已经不再限于同一类物种之间，动物、植物和微生物之间都可进行基因转移，改变宿主遗传特性，创造新品种(系)或新的生物材料。