琼脂糖凝胶电泳实验技巧及异常分析

职业培训 培训职业 2024-12-11
跑电泳是分子生物学实验的基本技术,无论是早期还是后期,进行分子生物学实验都离不开电泳技术。琼脂糖是电泳的常用材料,主要应用于DNA切胶回收、DNA分离以及验证DNA重组和质粒等是否切开。以下是一些琼脂糖凝胶电泳实验的技巧和细节。1. 凝胶制作1.1 凝胶浓度:根据实验需求

跑电泳是分子生物学实验的基本技术,无论是早期还是后期,进行分子生物学实验都离不开电泳技术。

琼脂糖是电泳的常用材料,主要应用于DNA切胶回收、DNA分离以及验证DNA重组和质粒等是否切开。以下是一些琼脂糖凝胶电泳实验的技巧和细节。

1. 凝胶制作

1.1 凝胶浓度:根据实验需求,凝胶浓度一般在0.8%到2.0%之间。未用完的凝胶可以再次融化,但融化次数过多会导致水分丢失,凝胶浓度升高,影响实验结果。补水方法包括标记刻度补水、称重补水或根据经验补水值补水。溴化乙锭可加入融化的琼脂糖中,终浓度为0.5ug/ml,也可在电泳结束后染色。

1.2 梳板的选用:根据上样量选择梳板,上样量小时应选择薄的梳板,以便于结果分析。梳齿与底板的距离至少要1mm,以防止损坏点样孔底层。拔梳板时需注意时间和方法,一般需冷却30分钟以上。

2. 点样

点样需加样缓冲液,其中包含甘油或蔗糖增加密度,指示剂用于指示样品迁移过程。上样缓冲液浓度为6x,使用时稀释到一倍浓度。点样方法是将移液器基本垂直点样孔,将样品注入孔内,并点上DNA分子量标准。

3. 电泳

将电泳仪的正负极与电泳槽的正负极相连,核酸带负电荷,从负极向正极移动。电泳缓冲液与制胶用电泳缓冲液应相同,电泳缓冲液刚好没过凝胶1mm为宜。电泳电压一般不超过5v/cm,电泳时间一般为30~60分钟,根据实验需求进行调整。

4. 结果分析

成功的电泳结果应表现为分子量标准条带整齐清晰,样品条带也整齐清晰。如果条带模糊暗淡,可能的原因包括溴化乙锭的质量和浓度、电泳槽中缓冲液的使用次数等。

5. 注意事项

包括酶切时DNA溶液体积、酶活力、酶液稀释、紫外光照射时间、溴化乙锭的安全操作等。

6. 异常现象及对策

在电泳过程中可能会出现一些异常现象,需要分析原因并采取对策。

标签

版权声明:本文由哟品培原创或收集发布,如需转载请注明出处。

本文链接:http://www.yopinpei.com/j/2/519833

猜你喜欢
其他标签