在进行伊红美蓝瑞氏染液的配制时，首先需要准备以下材料：瑞氏染料（830gm或1g），已干燥并放置于温箱过夜，以及甲醇（AR）500ml或600ml。步骤如下：

1. 将干燥的瑞氏染料放入乳钵中，用乳棒轻轻敲碎成粉末，然后持续研磨直到听不到研磨声，形成细粉末。接着，添加少量甘油或甲醇进行溶解和研磨，直至染料在乳缸中呈现“一面镜”光泽，无粉粒沉淀。

2. 接着，加入更多甲醇研磨，直至液体表面光亮。静置片刻后，将上层澄清液体倒入清洁的储存瓶中（推荐使用甲醇空瓶），重复此过程，直到乳钵中的染料和甲醇全部用完。最后，摇匀溶液，封口储存。

3. 瑞氏染液应存放在室温暗处，以确保染料的溶解和分解效果最佳。一般建议储存时间至少三个月。

关于缓冲液的作用，它对于染色过程至关重要，因为染料对氢离子浓度非常敏感。通过调整pH值，可以稳定染色效果。通常情况下，PBS缓冲液的pH值应维持在***~6.8的范围内。偏碱性染料会与缓冲液中的酸基发生中和，而偏酸性染料则会与碱基中和，保持pH值恒定。

为了配制pH6.4~6.8的弱酸性缓冲液，可以使用以下两种配方：

配方1：1% KH2PO4 30ml，与15倍的M/15 KH2PO4 73.5ml混合，加水至1000ml。

配方2：1% Na2HPO4 20ml，与15倍的M/15 Na2HPO4 26.5ml混合，加水至1000ml。

配制完成后，将缓冲液放置室温暗处，密封瓶口，以防止霉菌污染。一旦发现污染，应立即废弃该溶液。