光照在组培苗培养过程中具有重要作用。愈伤组织诱导时，暗培养更为适宜。然而，器官分化阶段则需要光照，且随着试管苗成长，光照强度需逐步增强。这有助于促进“异养”向“自养”转变，提升移植成活率。

温度调控在离体培养中至关重要。不同植物具有各自的最适生长温度。科学调整温度，可促进植物健康生长，保证培养效果。

湿度管理影响组培苗的生长与分化。培养容器内部湿度维持在100%，而培养室湿度则受季节和天气影响。过高或过低的湿度均不利。过低可能导致培养基失水、干枯或渗透压上升，影响生长；过高则易滋生病菌，引发污染。因此，对于耗氧量大的植物，需保持室内相对湿度在70%~80%之间。通过使用除湿机降低湿度或喷水增加湿度，可有效调节湿度。

氧气供给对植物组织培养至关重要。外植体呼吸需氧气，而液体培养中振荡培养能有效解决通气问题。对于耗氧量大的植物，在固体培养时需采用通气性良好的容器封口材料。对于耗氧量小的植物，密封性好的封口材料能有效防止菌类污染。

组织在培养基上生长一段时间后，需及时转移到新的培养基上，以补充营养、水分，消除代谢产物积累。这一过程称为继代培养。通常，在25~28℃下进行固体培养时，每4~6周进行一次继代培养。在组织块较小的情况下，可以直接将整块组织转移过去。对于较大的组织块，则需先将其分成几个小块再进行接种。