冈崎片段实验通过两种不同的方法，揭示了DNA复制的独特机制。首先，脉冲标记实验采用E.coli为材料，通过在培养基中加入同位素[3H]标记的dTTP，观察新合成的DNA片段大小。结果显示，新合成的冈崎片段（Okazaki fragment）长度约为1000~2000核苷酸（Nt），而模板链则大20~50倍。沉淀系数为20S，这表明它们是长片段。而脉冲追逐实验则关注早期合成片段的后续变化，发现标记的DNA片段不再维持短片段状态，而是与总DNA的长片段相似，其沉淀系数为70S~120S，显示片段连接过程。

冈崎片段实验揭示了“不连续复制”现象，即DNA复制时，无论是前导链还是后滞链，都先形成小片段。然而，实验结果与理论预测不符，因为理论上只有一半标记应存在于小片段中，但实际上所有片段都含有标记。Olivera提出的半不连续复制模型解释了这一现象：前导链连续复制，而后滞链半连续复制。这是因为DNApolⅢ无法区分dTTP和dUTP，导致dUTP掺入形成A·U对，但E.coli细胞内的dUTPase和尿嘧啶N-糖苷酶能确保U的正确处理，避免其混入DNA。

实验数据支持这一理论：在dUTPase缺失的突变体中，冈崎片段更短，因为U掺入增多；在尿嘧啶N-糖苷酶缺失的突变体中，新合成DNA有一半由片段组成，表明其作用于清除混入的U。而在dut-和ung-双突变体中，DNA的半不连续复制特性更为明显，这进一步证实了上述机制。真核生物的冈崎片段成熟机制更为复杂，涉及多种蛋白质如Polδ、RNaseHI、FEN1、Dna2和DNA连接酶，通过精确的加工和连接，确保基因组的稳定性。

扩展资料

冈崎片段，相对比较短的DNA链（大约1000核苷酸残基），是在DNA的滞后链的不连续合成期间生成的片段，这是ReijiOkazaki在DNA合成实验中添加放射性的脱氧核苷酸前体观察到的。