荧光

香豆素母体本身无荧光，而羟基香豆素在紫外灯下大多能显出蓝色荧光，在碱溶液中荧光大都增强，可以辨认。

香豆素类荧光的有无或强弱与分子中取代基的种类和位置有一定的关系，但荧光与结构之间的关系尚不太清楚

显色反应

香豆素分子中某些基团所给出的颜色反应可为鉴别香豆素类提供一定的参考。

1.异羟肟酸铁反应

这是由香豆素的内酯结构所发生的显色反应，在碱性条件下，内酯开环，与盐酸羟胺中的羟基缩合生成异羟肟酸，然后在酸性条件下再与三价铁盐络合而显红色。

2.酚羟基反应

具有酚羟基取代的香豆素类在水溶液中可与三氯化铁试剂络合而产生不同的颜色，可以判断羟基的有无。

重氮化试剂也可用于酚羟基的检查，若酚羟基的邻对位无取代时，可与重氮化试剂生成红色至紫红色的偶氮染料。

3.Gibb's反应

Gibb's试剂为2，6-二氯（溴）苯醌氯亚胺，它在弱碱性（pH9.4）条件下可与酚羟基对位的活泼氢缩合，生成蓝色的化合物。

该反应可判断香豆素分子中C6位是否有取代基存在。由于香豆素分子在碱性条件下内酯环被水解后所生成的酚羟基，如果其对位（即C6位）无取代基存在，可与Gibb's试剂反应产生蓝色。若C6位有取代，则Gibb's反应为负反应。

4.Emerson反应

与Gibb's反应一样，Emerson反应也是用以判断酚羟基对位有无取代的，在香豆素中用以判断C6位有无取代基存在。

Emerson试剂由4-氨基安替比林和铁氰化钾所组成，与酚羟基对位的活泼氢反应生成红色。

色谱检识

1.纸色谱

由于香豆素分子中多含有酚羟基显弱酸性，故其在进行纸色谱时，在碱性溶剂系统中的Rf值相对较大，在中性溶剂系统中则易产生拖尾现象。

常用的溶剂系统为含水有机溶剂系统，色谱后的滤纸可先在紫外灯下观察香豆素特有的荧光，再喷以10%氢氧化钾醇溶液或20%SbCl3氯仿溶液显色。

2.薄层色谱

香豆素化合物多具有酚羟基结构，在薄层色谱中多选硅胶作吸附剂，并用一定pH的缓冲溶液处理，可以得到较好的分离效果。酸性氧化铝也可选作吸附剂用。展开后的斑点除在紫外灯下观察荧光外，还可喷三氯化锑等显色剂