青霉素V钾片属于青霉素类抗生素，其抗菌作用广泛。它能够有效地对抗大多数革兰阳性菌，如球菌和杆菌，以及个别革兰阴性杆菌（如嗜血杆菌属），同时对螺旋体和放线菌也具有抗菌活性。然而，值得注意的是，大约90%的葡萄球菌（包括金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌）由于产生β-内酰胺酶，能够分解青霉素V钾片使其失去活性。与青霉素相比，它对敏感菌株的抗菌活性较弱，对产生青霉素酶的菌株无效，其作用机制在于抑制细菌细胞壁的合成，促使细菌快速破裂和溶解。

在药代动力学方面，青霉素V钾片具有耐酸性，口服后不会被胃酸破坏。大约60%的药物在十二指肠被吸收，0.5克的口服剂量在1小时内达到血药峰浓度，浓度通常在3毫克/升至5毫克/升之间。然而，食物的摄入可能会影响其吸收。青霉素V钾片的蛋白结合率约为80%，意味着大约20%至35%的药物以原形形式从尿液中排出。其血消除半衰期（t1/2β）大约为1小时，这意味着药物在体内的代谢和清除相对较快。