一、革兰氏染色法是一种复染法，涉及至少两种染料。它利用结晶紫、碘液和番红等染料对细菌细胞壁进行着色，从而区分革兰氏阳性菌和阴性菌。

二、革兰氏染色法的主要步骤及其关键点：

1. 制片：从菌种培养物中取出样本，进行涂片、干燥和固定。应使用活跃生长期的幼培养物进行染色，确保涂片均匀且不过厚，避免脱色不彻底导致假阳性结果。固定时温度不宜过高，以玻片不烫手为宜。

2. 初染：向制片中滴加结晶紫染料，染色1-2分钟，随后水洗去除多余染料。

3. 媒染：用碘液冲洗去残余染料，然后用碘液覆盖约1分钟，再次水洗。

4. 脱色：用滤纸吸去玻片上的水分，倾斜玻片，用95%乙醇进行脱色，直到乙醇不再呈现紫色时立即停止，并水洗。乙醇脱色是操作的关键步骤，脱色不足会导致阴性菌被误染为阳性菌，过度脱色则会导致阳性菌误染为阴性菌。通常脱色时间为20-30秒。

5. 复染：使用番红液复染约2分钟，随后水洗。

6. 镜检：制片干燥后，使用油镜观察。染成蓝紫色的菌体是革兰氏阳性菌，而染成红色的菌体是革兰氏阴性菌。

革兰氏染色的原理是结晶紫与碘形成不溶于水的复合物，并沉积在细菌细胞壁中。革兰氏阳性菌的细胞壁较厚且致密，不易被脱色剂渗透，因此保持紫色。而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，含有较多的类脂，脱色剂会使外膜溶解，导致紫色复合物溶出，因此复染时呈现红色。