酶促反应中的和值有几种测量方法。固定反应中的酶浓度，然后分析几种不同底物浓度下的起始速度，就可获得和值。但直接从起始速度对底物浓度的图中确定Km或值是很困难的，因为曲线接近时是个渐进过程。所以通常都是利用米氏方程的转换形式求出Km和值。常用的米氏方程转换形式是Lineweaver-Burk方程，也称为双倒数方程。

使1/ v 对1/[S]作图，可以获得一条直线。从直线与x轴的截距可以得到1/Km的绝对值；而1/Vmax是直线与y轴的截距。双倒数作图直观、容易理解，为酶抑制研究提供了易于识别的图形。

缺点：底物浓度低时，坐标点集中于坐标左下方，使得误差增大，往往偏离直线，Vm、Km无法精确定出。

解决方法：底物浓度配成1/[S]的浓度级差，而不是[S]的浓度极差，使点距离平均，再以最小二乘法线性回归分析。